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A tecnologia Illumina utilizada pela Box4Dog em seus testes nasceu após muito trabalho. Hoje, vamos conversar um pouquinho sobre a tecnologia de sequenciamento genético. Há três grandes processos utilizados no sequenciamento genético: PCR (Reação da polimerase em cadeia), HYB (Hibridização) e NGS (Sequenciamento de nova geração).
Cada tecnologia possui vantagens e desvantagens, o que obriga os cientistas a utilizarem de acordo com a necessidade. Ao mesmo tempo, todas possuem pontos em comum, ou na manipulação do material ou na formatação dos ensaios.
A imagem abaixo foi extraída o artigo Diagnostic based on nucleic acid sequence variant profiling: PCR hybridization, and NGS approaches e é um esboço das intercessões entre as três principais tecnologias e suas combinações. Neste artigo, Khodakov, et al. enfatiza também a escolha do procedimento de acordo com a demanda da pesquisa.
Figura 1: Sobreposição e individualidades das três principais técnicas de sequenciamento genético e seus desdobramentos.
A tecnologia NGS (Next-generation sequencing) é a mais indicada para sequenciamentos em larga escala. Ou seja, quando a Box4Dog sequencia mais de 200 genes pesquisando mutações, ela precisa utilizar uma tecnologia confiável e que demande um tempo mínimo. O que não é o caso do PCR clássico que já tanto ouvimos falar. Uma verdadeira revolução na biologia molecular.
Dentre os vários desdobramentos da NGS está a tecnologia Illumina, utilizamos a tecnologia Illumina na qual nucleotídeos são portadores de etiqueta fluorescente e de um terminador reversível se ligam à fita molde de DNA com complementaridade. A emissão de fluorescência é indicativo da adição de um determinado nucleotídeo e da clivagem do terminador para que uma nova base possa se ligar e, assim, completar o sequenciamento do fragmento. As imagens abaixo, descritas por Solodskikh, et al. representam o ciclo de cópia e de sequenciamento pela tecnologia Illumina.
Figura 2: Etapas de preparação da biblioteca para sequenciamento de Illumina. 
Figura 3: Amplificação clonal pela ponte PCR. 
Figura 4: Detecção de sinal durante o sequenciamento de Illumina.
A Box4Dog faz questão de utilizar sempre as melhores tecnologias, garantindo a qualidade e confiabilidade dos resultados do teste genético do seu pet.
Qualquer dúvida, agende uma conversa com nossos especialistas. Vamos te atender com todo carinho!
Bibliografia
- Solodskikh, S. A., et al. "Postgenomic technologies for genomic and proteomic analysis in biological and medical research." Ukrainian Journal of Ecology 9.4 (2019): 765-776.
- Khodakov, Dmitriy, Chunyan Wang, and David Yu Zhang. "Diagnostics based on nucleic acid sequence variant profiling: PCR, hybridization, and NGS approaches." Advanced drug delivery reviews 105 (2016): 3-19.
- Bentley, David R., et al. "Accurate whole human genome sequencing using reversible terminator chemistry." nature 456.7218 (2008): 53-59.
- Zhang, Jiajie, et al. "PEAR: a fast and accurate Illumina Paired-End reAd mergeR." Bioinformatics 30.5 (2014): 614-620.
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